EKSTRAKSI DAN KARAKTERISASI ENZIM ENDONUKLEASE RESTRIKSI KASAR DARI BAKTERI Escherichia coli

Abstract

Enzim Endonuklease diisolasi dari beberapa jenis bakteri termasuk Escherichia coli. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui karakteristik enzim endonuklease restriksi kasar dari bakteri E. coli yang dipengaruhi kondisi suhu dan pH. E. coli diisolasi dari sampel air sumur dan ditumbuhkan pada media Eosin Methylene Blue Agar (EMBA). Isolat bakteri E coli digunakan dalam pengukuran kurva pertumbuhan untuk mengetahui fase pertumbuhan bakteri serta mendapatkan waktu yang optimum untuk memproduksi ekstrak kasar enzim endonuklease. Proses produksi enzim endonuklease dengan metode sentrifugasi pada kecepatan 10000 rpm selama 30 menit pada suhu 4°C dan diulang 4 kali. Hasil sentrifugasi dikarakterisasi dengan fraksinasi menggunakan ammonium sulfat dengan tingkat kejenuhannya berbeda-beda yaitu, (0-20%, 20-40%, 40-60%, 60-80%, 80-100%) dan diukur aktivitas enzimnya menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 600 nm. Hasil fraksinasi yang aktivitasnya paling optimum pada fraksi 0-20%. Selanjutnya dilakukan pengujian aktivitas enzim dengan variasi suhu dan Ph menggunakan spektrofotometer dengan panjang gelombang 600 nm. Hasilnya pada variasi suhu aktivitas enzim paling optimum terjadi pada suhu 37°C, sedangkan pada variasi pH aktivitas optimum enzim terjadi pada pH 7.